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微量分光光度計原理及應用


   微量分光光度計能夠快速準確的定量檢測核酸、蛋白質等溶液。具有使用方便、消耗樣品少(僅2μl)、不用預熱、能迅速清理殘留樣品、不需要比色皿或其它樣品定位裝置、樣品不需要稀釋等特點,常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量,目前已成為眾多實驗室的常規儀器。


  工作原理

  超微量分光光度計進行濃度測定的原理是根據朗伯-比爾(Lamber-Beer)定律,

A=K·C·L

   式中,A為吸光度;K為吸(消)光系數;C為溶液的濃度;L為液層厚度。此公式說明:在入射光一定時,溶液的吸光度與溶液的濃度及液層厚度成正比。此式就是光的吸收定律的數學表達式,又叫朗伯-比爾定律。


  核酸定量

  核酸的定量是超微量分光光度計使用頻率最高的功能??梢远繙y定溶于緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA以及RNA含量。這是由于核酸、核苷酸及其衍生物都具有共軛雙鍵,具有紫外吸收的特性,最大的吸收波長在260nm,吸收波谷在230nm。

  除了核酸濃度,分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度,如A260/A280的比值,用于評估樣品的純度,因為蛋白的吸收峰是280nm。純凈的樣品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8 或者2.0,表示存在蛋白質或者酚類物質的影響。A230表示樣品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。


  蛋白質直接定量

  這種方法是在280nm波長,直接測試蛋白。蛋白質直接定量方法,適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質。紫外直接定量法相對于比色法來說,速度快,操作簡單;但是容易受到平行物質的干擾,如DNA的干擾;另外敏感度低,要求蛋白的濃度較高。


  比色法蛋白質定量

  蛋白質通常是多種蛋白質的化合物,比色法測定的基礎是蛋白質構成成分:氨基酸(如酪氨酸,絲氨酸)與外加的顯色基團或者染料反應,產生有色物質。有色物質的濃度與蛋白質反應的氨基酸數目直接相關,從而反應蛋白質濃度。

  比色方法一般有BCA,Bradford,Lowry 等幾種方法。(具體內容可參考本官網“常用蛋白質濃度測定方法匯總”) 


Nano系列微量分光光度計


Nano-100微量分光光度計Nano-200微量分光光度計  Nano-300微量分光光度計

Nano-100          Nano-200         Nano-300 


  產品特點

l 操作界面直觀易用,數據準確,重復性高

l 兩種量程,高低濃度均可精確測量

l 每次檢測僅需0.5μl~2ul樣品,無需稀釋,直接測量

l 5s即可完成檢測,氙閃光燈,壽命長達10年

l 單機操作,方便快捷(Nano-200,Nano-300)

l Nano-300新增比色皿模式,菌液濃度直接測量



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此文關鍵詞:微量分光光度計
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