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MTT


什么是MTT,什么是MTT法

 MTT,商品名稱噻唑藍

 全稱為3-(4,5)-dimethylthiahiazo(z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide漢語化學名為 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽,一種黃顏色的染料,由于應用于細胞存活率的檢測而被熟知。在細胞培養中,MTT不僅僅是一個化學物品,更是一種實驗方法。


 MTT原理

 MTT比色法,是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚(Formazan)并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細胞中的甲瓚,用酶標儀在490nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內,MTT結晶形成的量與細胞數成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經濟。


 MTT用途

 MTT主要有兩個用途  

1.藥物(也包括其他處理方式如放射線照射)對體外培養的細胞毒性的測定;   

2.細胞增殖及細胞活性測定。  檢測原理如上所述,根據測得的吸光度值(OD值),來判斷活細胞數量,OD值越大,細胞活性越強(如果是測藥物毒性,則表示藥物毒性越小)。


 MTT實驗步驟 

 普通MTT法實驗步驟:  

1:接種細胞:用含10%胎小牛血清得培養液配成單個細胞懸液,以每孔1000-10000個細胞接種到96孔板,每孔體積200ul.  

2 : 培養細胞:同一般培養條件,培養3-5天(可根據試驗目的和要求決定培養時間)。  

3:呈色:培養3-5天后,每孔加MTT溶液(5mg/ml用PBS配制,pH=7.4)20ul.繼續孵育4h

 終止培養,小心吸棄孔內培養上清液,對于懸浮細胞需要離心后再吸棄孔內培養上清液。每孔加150ul DMSO,振蕩10min,使結晶物充分融解。  

4:比色:選擇490nm波長,在酶標儀上測定各孔光吸收值,記錄結果,以時間為橫坐標,吸光值為縱坐標繪制細胞生長曲線。


 MTT檢測方法    

 MTT實驗結果常用酶標儀讀取,通過比較不同孔間OD值大小來判斷細胞生長狀況,以此作為比較藥物毒性大小或者細胞活性的重要依據。


 AMR-100酶標儀

AMR-100酶標儀

 AMR-100酶標儀是一款基于濾光片的高品質光吸收酶標儀,波長范圍340nm~750nm,適合科研和臨床的應用。適用96孔板,可滿足不同通量的要求。7英寸觸屏液晶顯示,易于使用,不需操作鍵盤,數據和程序可保存在儀器內,或者通過U盤導出。讀板速度快,能實現快速測量,提供準確性高,重現性好的測量結果。是實驗室酶標儀的理想選擇。

 性能指標
 顯示 7英寸彩色觸摸屏,分辨率為800*480像素
 光源 鹵鎢燈,壽命可達2000h
 波長范圍 340-750nm,覆蓋整個可見光波長
 濾光片 8片濾光片輪,標配4塊濾光片:405,450,492,630nm,另可選配340nm-750nm波長濾光片
 濾光片帶寬 ±3nm
 讀數范圍 0-4.000Abs
 線性范圍

0-2.000A時≤±1% ;
2.000-4.000A時≤±2% 

 分辨率 0.001Abs
 準確性(405nm) ±1% (0-3Abs)
 ±2%(3-4Abs)
 精確性(405nm)

CV≤0.2%(0-3Abs)
CV≤1.0%(3-4Abs)標準測量模式

測量速度<6S 96孔板整板檢測
用戶界面內置軟件
操作顯示觸屏輸入,液晶顯示全板信息,可外接鍵盤鼠標
內存可存儲200個測量程序和10萬個測量結果(96孔板)
接口3個USB接口,分別用于連接電腦,打印機和U盤
電源AC100-240V,50-60Hz



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此文關鍵詞:MTT 酶標儀
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