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酶標儀常見應用簡介—ELISA



 ELISA(Enzyme-linked Immunosorbent assy),中文名:酶聯免疫吸附實驗,免疫學中經典的技術之一。ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。


 進行檢測時,樣品中的受檢物質(抗原或抗體)與固相載體表面的抗原或抗體特異性結合。通過洗板除去非結合物,再加入酶標記的抗原或抗體,此時,能固定下來的酶量與樣品中被檢物質的量相關。通過加入與酶反應的底物后顯色,根據顏色的深淺可以判斷樣品中物質的含量,進行定性或定量的分析。


 根據試劑的來源和標本的性狀及檢測的具備條件,可設計出各種不同類型的檢測方法:


1.雙抗體夾心法測抗原
 針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標抗體。適用于測定二價或二價以上的大分子抗原,不適用于測定半抗原及小分子單價抗原,因其不能形成兩位點夾心。


2.競爭法測抗原
 首先將特異性抗體包被于固相載體表面,經洗滌后分成兩組:一組加酶標記抗原和被測抗原的混合液,另一組只加酶標記抗原,經孵育洗滌后加底物顯色,這兩組底物降解量之差,即為所要測定的未知抗原的量。此方法測定的抗原只要有一個結合部位即可,對小分子抗原如激素和藥物類的測定常用此法。優點是快,缺點是需要較多量的酶標記抗原。

 



3.免疫抑制法測抗原
 被檢標本對底物顯色的抑制程度與標本中所含抗原的量成正比,二者之差即為預測抗原的量。

 


4.間接法測抗體
 是檢測抗體常用的方法,原理為利用酶標記的抗抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體。
 

 
  本法只要更換不同的固相抗原,可以用一種酶標抗體檢測各種與抗原相應的抗體。主要用于對病原體的檢測而進行傳染病的診斷。

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此文關鍵詞:酶標儀
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