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ELISA實驗前期準備注意事項

 

 ELISA是免疫學檢測、診斷研究最常用的方法之一,用于ELISA測定的臨床標本最為常用的是血清(漿),有時因為特定的檢測目的,也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等標本。ELISA的試劑盒也多種多樣,一般只要嚴格遵照試劑盒所附說明書操作,均能得到理想的結果?,F將ELISA實驗操作中注意事項總結如下,以期給大家帶來一些啟發:

 

 1.樣本準備

 在采集血樣和分離血清的過程中應盡可能避免溶血。因為紅細胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質,在以HRP為標記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色,而導致檢測的不準確性。同時也應避免細菌污染,因為菌體內可能含有內源性的HRP從而導致檢測的假陽性。

 分離血清時最好在室溫或者37℃水浴中凝固,而不要放在冰箱凝固。ELISA血清樣本要求新鮮,如果要貯藏后再檢測,應分裝在-20℃以下,避免反復凍融。反復凍融所產生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產生破壞作用,會使抗體效價跌落,所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存,從而引起假陰性結果。此外,凍融標本的混勻亦應注意,不要進行劇烈振蕩,反復顛倒混勻即可。

 

 2.試劑準備

 在臨床實驗室,對試劑準備一般不太注意,通常的做法是,在實驗時將試劑從冰箱中拿出來即用,而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時間不夠的問題,其直接的后果是對一些弱陽性標本的檢測出現假陰性。因此在ELISA測定中試劑的準備最為關鍵的是,在實驗開始前,將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20分鐘以上后,再進行測定,以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的,主要是為了在后面的溫育反應步驟中,能使反應微孔內的溫度能較快地達到所要求的高度,以滿足測定要求。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存。并要注意不同廠家的試劑不能混用。

 其次,目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實驗室使用時對所提供的濃縮液稀釋配制,因此稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應保證質量。


下期將為您帶來ELISA實驗過程中注意事項,敬請期待......


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